一、標準化流程，實現穩定可靠的細胞凍存

整套方案流程，保障細胞凍存與復蘇效果穩定可控

完整操作流程：細胞處理→擴大培養→凍存保護→低溫凍存→長期儲存

二、實驗室選擇 Bambanker™ 的核心原因

核心產品優勢

1.無血清配方

2.細胞復蘇存活率＞90%

3.操作簡便快速，節省實驗時間

4.符合 GMP 生產規范

三、從常規細胞培養到穩定復蘇

細胞凍存是細胞實驗流程中最容易出現結果不穩定的環節：操作手法、處理時長的微小差異，都會造成細胞復蘇效果天差地別。本手冊梳理決定凍融實驗成敗的關鍵步驟與質控要點，講解 Bambanker™如何實現穩定的細胞復蘇效果，減少不同操作人員、不同實驗批次之間的數據偏差。

四、什么是 Bambanker™？

Bambanker™ 是一款即用型無血清細胞凍存液，適用于體外培養細胞的長期低溫保藏。

目前已有覆蓋 120 余種細胞與組織的同行評審文獻驗證其性能；相比含血清凍存液，本品可提升復蘇存活率，同時降低實驗數據波動。

產品帶來的便利

•儲存靈活：可直接放入 - 80℃冰箱凍存，也可轉入液氮（LN?）進行超長期保存

•流程簡化：無需程序降溫、梯度分步凍存操作

•長期結果穩定：無血清、成分明確，批次間差異小

適用場景

1.常規細胞建庫（制備工作細胞株 / 備份凍存管，保障日常細胞培養持續開展）

2.主細胞庫 / 工作細胞庫構建，保證多人、多時間點實驗結果可重復

3.高價值、難以重復獲取的細胞（腫瘤細胞、干細胞、原代細胞等）

凍存操作標準化為何至關重要？

絕大多數凍融實驗的數據偏差都來源于凍存階段。凍存時細微操作差異（室溫放置時長、吹打力度、降溫速率），都會顯著影響細胞復蘇后的存活狀態。

Bambanker™省去梯度程序降溫步驟，但只有統一規范操作，才能保證不同凍存管、不同操作人員獲得一致的復蘇結果。

Bambanker™是細胞凍存流程的核心配套試劑，搭配專用配套耗材，可實現日常操作全程標準化、無菌可控。

五、Bambanker™ 全系列產品，適配各類細胞

全系 Bambanker™ 均為無血清、開蓋即用型凍存液。

細胞種類、操作手法都會影響最終復蘇效果，本文僅作基礎參考，各實驗室需建立專屬標準對照實驗。

手冊匯總了所有使用 Bambanker™凍存的細胞及 3D 培養樣本相關資料。

六、快速選型指南：10 秒選出適配型號

•需要規避 DMSO → Bambanker™ 無 DMSO 款

•要求無動物源組分 → Bambanker™ hRM

•高通量、簡化流程、免離心 → Bambanker™ Direct 直凍款

•絕大多數常規細胞通用選型 → Bambanker™ 標準款

七、凍存：凍融流程中影響最大的關鍵環節

凍存階段的操作時長、處理方式、低溫保護條件不當，會直接導致細胞復蘇活力下降，增加重復實驗工作量。

統一凍存操作標準，是提升復蘇存活率、減少重復實驗高效的手段。

八、凍融實驗失敗的常見原因

1.凍存前細胞狀態不佳（細胞應激、細胞密度過密或過?。?/span>

2.操作不統一（處理時長、吹打方式、室溫暴露時長不一致）

3.凍存保護條件不統一

4.不同實驗室、操作人員手法差異，相同細胞復蘇結果全不同

5.規?；瘍龃嬷貜托圆?，樣本數量越多誤差越大

九、優先選用 Bambanker™ 的理由

一次細胞復蘇失敗，會耗費數天至數周實驗周期。標準化凍存流程可大幅減少重復實驗；凍存環節是影響細胞復蘇效果、實驗規模、重復工作量的核心節點，應當優先完成該環節標準化。

十、Bambanker™ 多能干細胞復蘇效果驗證

實驗目標：復蘇后細胞數量穩定、細胞表型不發生偏移

實驗參數：

•細胞類型：小鼠多能干細胞

•凍存試劑：Bambanker™

•檢測指標：①細胞密度 ②細胞表型維持能力

1.細胞密度

對比組別：凍存前 VS 復蘇培養 2 天

復蘇后細胞密度高，細胞形態與凍存前無明顯差異

2.細胞表型維持（堿性磷酸酶 ALP 染色）

檢測時間：復蘇培養 3 天

數據結論：復蘇后細胞密度高、形態與凍存前基本一致，培養 3 天 ALP 染色活性穩定，凍存過程中細胞表型未發生改變。

* 數據致謝：日本東京工業大學生命理工學院生物分子工程系田川實驗室安博士提供

針對多能干細胞，僅保證細胞存活遠遠不夠，還需復蘇后細胞不發生表型漂移。本實驗通過兩項實用指標（復蘇細胞形態 / 細胞密度、多能標志物 ALP 染色）驗證 Bambanker™復蘇品質。

十一、Bambanker™ 支持 - 80℃長期低溫儲存

多款細胞在 - 80℃條件下穩定保存 5 年，細胞活力無明顯衰減

液氮常被視作長期保藏的黃金標準，但 - 80℃低溫冰箱具備取用便捷、安全性高、日常使用更省心等實操優勢。

使用 Bambanker™凍存的細胞，在 - 80℃儲存最長 5 年仍可維持高細胞活力。

測試細胞樣本

懸浮細胞：K562、JURKAT

貼壁細胞：HeLa S3、OKT4、HEK293

•多款貼壁、懸浮細胞在 - 80℃長期儲存（最長 5 年）后仍保持高活力

•常規細胞庫可直接選用 - 80℃儲存，大幅降低液氮使用與運維成本

實操參考準則

•常規細胞建庫：-80℃冰箱儲存

•超長期保藏：液氮（LN?）

十二、Bambanker™ 標準凍存操作流程（附影響復蘇效果的核心質控點）

步驟 1：確認細胞滿足凍存標準

細胞形態健康、生長狀態穩定、細胞密度適配對應細胞類型；對數生長期凍存可大化復蘇存活率。

步驟 2：消化細胞，制備單細胞懸液

使用實驗室常規消化方法輕柔處理；根據實驗流程需求離心收集細胞沉淀。

步驟 3：Bambanker™重懸細胞（無血清體系）

將細胞轉移至凍存管，加入 1mL Bambanker™重懸；

* 注意：避免產生氣泡，所有凍存管室溫暴露時長保持一致。

步驟 4：直接放入 - 80℃凍存，無需梯度降溫

凍存管置于 - 80℃冰箱完成凍存與短期保藏；

可選操作：凍存完成后轉移至液氮長期儲存（非必需步驟）。

凍存操作一致性 = 復蘇結果一致性

核心質控關鍵點

1.處理時長：所有凍存管室溫暴露時間統一

2.溫度暴露：盡量縮短室溫放置時長，操作標準統一

3.細胞重懸：輕柔吹打，力度統一，禁止產生大量氣泡

4.標簽與溯源：清晰標記樣本信息，避免樣本混淆、重復實驗

5.操作標準化：全程嚴格遵循統一操作步驟

十三、凍存數據波動的常見誘因

各凍存管處理時長不一致、室溫暴露時長差異；標簽模糊、無凍存管存放臺賬；冰箱內放置方式不統一；吹打力度過大產生大量氣泡。

Bambanker™ 細胞復蘇與培養流程（影響復蘇效果的前期關鍵操作）

復蘇前準備

1.提前預熱培養基，備好培養皿 / 培養瓶

2.提前標記樣本，規劃凍存管對應培養容器

快速融化凍存細胞

37℃恒溫水浴 / 恒溫箱快速融化，僅融至液體狀態即可，禁止長時間升溫放置。

轉移細胞，輕柔操作

1.將 1mL 含細胞的 Bambanker™懸液加入預熱新鮮培養基

2.20℃、300–400×g 離心 3 分鐘

3.棄去上清液

* 禁止劇烈吹打，避免產生氣泡

鋪板培養

使用預熱培養基重懸細胞，轉移至培養容器。

復蘇后 24–72 小時穩定培養

維持穩定培養環境，減少不必要操作；持續觀察細胞形態、貼壁與增殖狀態。

換液

根據對應細胞類型遵循實驗室標準換液時間，所有實驗組保持換液時長統一。

復蘇數據記錄

對比實驗室標準對照組，記錄復蘇效果（貼壁率、細胞形態、增殖速度）；登記關鍵信息：凍存管編號、鋪板密度、培養容器、處理時長、操作人員。

復蘇操作規范（推薦操作 & 禁止操作）

十四、全流程總覽

細胞培養啟動 → 操作臺前期準備 → 維持無菌操作環境 → 細胞低溫凍存 → 細胞長期儲存

配套耗材：FastGene 血清移液管、EasyFlow 移液輔助設備、細胞培養轉運盒、凍存管、CapMaster Pro 管蓋開關設備

Bambanker™是整套細胞凍存流程的核心試劑

NIPPON Genetics 歐洲分部提供全流程凍存配套解決方案：以 Bambanker™凍存液為核心，搭配全套配套耗材，保障日常操作標準化、無菌可控。

十五、無菌操作與流程穩定配套耗材詳解

FastGene EasyFlow 移液輔助設備（貨號 FG-SPC）

作用：優化細胞培養最頻繁操作 —— 無菌液體轉移

適用場景：常規換液、細胞洗滌、超凈臺內樣本轉移

FastGene 血清移液管（系列貨號 FG-SP#）

作用：覆蓋全規格液體轉移需求，從少量補液到全量換液均可適配

適用場景：細胞換液、洗滌、傳代、樣本轉移；可與 EasyFlow 設備配套

FastGene CapMaster Pro 管蓋自動開關設備（貨號 FG-CDC05）

作用：省去反復手動開合凍存管的重復人工操作

適用場景：所有需要頻繁開蓋、關蓋的無菌實驗步驟

FastGene 細胞培養轉運盒（貨號 CC01）

作用：細胞轉運、孵育過程降低污染風險

適用場景：培養容器轉運至孵箱，孵育過程防護細胞樣本

FastGene 凍存管（系列貨號 FG-CRY#）

作用：低溫儲存安全穩定，配套 2D 二維碼標簽插件（FG-CRY-2D）實現樣本清晰溯源

適用場景：細胞分裝凍存、長期低溫保藏、凍存盒有序存放樣本

十六、產品應用范圍廣泛

已有超 120 種細胞、組織相關同行評審文獻驗證 Bambanker™應用效果，適配多種實驗體系

覆蓋細胞樣本范圍

1.免疫 / 造血細胞、上皮細胞、干細胞 / 祖細胞、原代細胞 / 患者來源樣本、3D 類器官模型

2.數據均來自引用 Bambanker™的同行評審文獻，每種細胞類型對應一篇代表性文獻

3.文獻附帶 DOI 鏈接，可直接查閱原始實驗數據

部分適配細胞目錄

干細胞、祖細胞及其分化子代

人脂肪間充質干細胞（ASCs）

人膠質母細胞瘤干細胞神經球

提示：本清單僅作參考，無法保證所有實驗室實驗方案均達到同等效果，需結合實驗室自身質控標準開展預實驗驗證。

十七、產品總覽

一、Bambanker™凍存液全系規格及貨號

試用申請：可申請 1mL 分裝于凍存管的 Bambanker™樣品，方便快速測試后再批量采購。

二、FastGene 配套耗材規格及貨號

更多產品信息，請聯系授權代理商：上海起發實驗試劑有限公司

（注：本文內容基于品牌公開資料及行業常規信息整理，具體以品牌信息文檔為準。）