【Abcam實驗支持】如何確定蛋白濃度？

確定溶液中蛋白含量最快的方法是使用 UV-vis 直接測定吸光度，但是通常這種方法不夠準確或者不夠靈敏。 

使用 Bradford 或 BCA 檢測可以對大多數蛋白質進行高度準確的定量。

如何使用 UV-vis 確定蛋白質濃度？

蛋白濃度可通過測量 280 nm 處的 UV 吸光度來估算；蛋白質因其色氨酸和酪氨酸殘基的吸光作用而在此處出現一個高吸收峰（通常稱為 A280）。 使用比爾-蘭伯特定律（見下方公式）可以輕松將該峰值轉化為蛋白濃度。 這種方法主要用于粗略估計濃度，例如驗證純化是否成功。

A = ?cl

●A 代表吸光度（如 A280）

● 代表摩爾消光系數 (M?-1cm-1)，可從文獻中查到 

●c 代表濃度（單位為 M）

●l 代表路徑長度，即比色皿/微孔板的長度，單位為 cm

如何使用 Bradford 檢測確定蛋白質濃度？

Bradford 檢測是一種比色法檢測，需要借助蛋白質與考馬斯亮藍的結合。

●當染料在酸性介質中與蛋白質結合時，最大吸收波長從 465 nm 變為 595 nm，顏色從棕色變為藍色。

●未知的蛋白質濃度是通過參考濃度已知的蛋白質（通常是牛血清白蛋白 [BSA]）的標準曲線估算得到的。

如何使用 BCA 檢測確定蛋白質濃度？

BCA 檢測是一種比色法檢測，其原理是，Cu2  離子被蛋白質還原，隨后與 BCA 相結合。

●生成的 Cu+ 離子與 BCA 試劑形成深色復合物，其在 562 nm 處具有很強的吸光度。

●未知的蛋白質濃度是通過參考濃度已知的蛋白質（通常是牛血清白蛋白 [BSA]）的標準曲線估算得到的。

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